說一說激光顯微切割的優(yōu)缺點有哪些

　　激光顯微切割的基本原理是通過一低能紅外激光脈沖激活熱塑膜———乙烯乙酸乙烯酯（ethylenevinylacetate，EVA）膜（其大吸收峰接近紅外激光波長），在直視下選擇性地將目標細胞或組織碎片粘到該膜上。LCM系統(tǒng)包括倒置顯微鏡、固態(tài)紅外激光二極管、激光控制裝置、控制顯微鏡載物臺（固定載玻片）的操縱桿、電耦合相機及彩色顯示器。用于捕獲目標細胞的熱塑膜直徑通常為6mm，覆在透明的塑料帽上，后者恰與后繼實驗所用的標準0.5ml離心管相匹配。

　　激光顯微切割顯著的優(yōu)點在于其迅速、準確和多用途的特性。結(jié)合組織結(jié)構(gòu)特點以及所需的切割準確度，通過選擇激光束的直徑大小，可以迅速獲取大量的目標細胞。LCM與以顯微操作儀為基礎的顯微切割技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點：(1)分離細胞速度快，無需精巧的操作技能；(2)捕獲細胞和剩余組織的形態(tài)學特征均保持完好，可以較好地控制捕獲細胞的特異性；(2)捕獲細胞與塑料帽結(jié)合緊密，減少了組織損失的風險。相比而言，除了激光切割彈射微分離系統(tǒng)以經(jīng)染色的用于存檔的切片也可被成功進行顯微切割。

　　盡管LCM應用廣泛，但對于常規(guī)染色、固定且不加蓋玻片的組織切片，其視覺分辨率受到很大限制。而對于那些本身缺乏一定結(jié)構(gòu)特點的復雜組織（如淋巴組織，廣泛浸潤的腺癌等），要準確分離出某一類細胞幾乎是不可能的。Fend等通過采用特殊染色，尤其是免疫組化方法，使目標細胞或想要去除的細胞變得更加醒目，從而解決了上述難題。

　　應用LCM，偶爾會出現(xiàn)無法將選擇的細胞從切片上移走的情況，出現(xiàn)這種結(jié)果有兩種原因：(1)細胞與熱塑膜之間的粘合力不足，通常是由于組織未*脫水或激光的能量設置過低造成的；(2)組織切片與載玻片間的粘合力過強，通常發(fā)生在顯微切割干燥時間過長的冰凍切片。針對不同樣本組織（包括免疫組化染色的組織切片），一些研究小組分別詳盡報道了采用適合的處理方法，以達到顯微切割條件。