激光共聚焦成像是一項(xiàng)非常成熟的技術(shù),隨著光譜式檢測方法成為共聚焦成像的主流,對于多色成像/拆分也愈發(fā)成熟,利用不同熒光染料的發(fā)射光譜的不同來進(jìn)行多通道拆分能夠滿足大多數(shù)情況下的需求,但是由于存在一些發(fā)射光譜大幅重疊的熒光標(biāo)記組合和一些自發(fā)熒光信號的存在,有時(shí)候利用熒光強(qiáng)度還是不能夠很好的拆分多熒光標(biāo)記。此時(shí)除了利用智能分析軟件來進(jìn)行基于熒光強(qiáng)度拆分的方法之外,還可以利用熒光壽命來進(jìn)行成像。熒光壽命是熒光物質(zhì)的固有屬性,與染料濃度、激發(fā)光強(qiáng)度等因素?zé)o關(guān),取決于染料內(nèi)在性質(zhì)以及所處的微環(huán)境,因此相比于熒光強(qiáng)度成像,熒光壽命成像會更加穩(wěn)定,并能同步獲取更多維度的數(shù)據(jù)信息。
熒光強(qiáng)度圖像(左)與熒光壽命圖像(右),紅色:細(xì)胞膜;青色:葉綠體;黃色:肌動(dòng)蛋白。
對于長時(shí)間活細(xì)胞觀察實(shí)驗(yàn)而言,由于熒光壽命并不會受到熒光漂白所影響,所以更適合一些定量實(shí)驗(yàn)。
用Oregon Green 488-BAPTA標(biāo)記的鈣震蕩動(dòng)態(tài)
熒光壽命還受到染料所處微環(huán)境的影響,所以往往被用來開發(fā)生物傳感器來檢測一些細(xì)胞微環(huán)境的指標(biāo),比如pH值等。利用檢測pH變化來觀察溶酶體成熟過程
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講師介紹
齊瑤
徠卡生命科學(xué)應(yīng)用專員
2015年畢業(yè)于日本神戶大學(xué)醫(yī)學(xué)部,研究方向?yàn)榉肿铀幚韺W(xué)。擁有多年細(xì)胞分子生物學(xué)科研經(jīng)歷,在寬場顯微鏡成像和激光共聚焦顯微鏡的各類應(yīng)用領(lǐng)域積累了豐富經(jīng)驗(yàn)。2019年加入徠卡,主要負(fù)責(zé)光學(xué)顯微鏡產(chǎn)品的技術(shù)支持。
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